ELISA試劑盒在優(yōu)化免疫學(xué)反響條件后,建立了克百威直接競賽ELISA法和直接競賽ELISA法,檢查限分別為0.005mg/L和0.01mg/L,檢查線性范圍分別為0.005~10mg/L和0.01~10mg/L,并在此根底上研發(fā)了兩種用于檢查水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒,其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好,批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0%,試劑盒檢查的正確度高, ELISA試劑盒除嘔吐物樣品外,其余樣品的回收率均在89.62%以上。
本研究ELISA試劑盒以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為根底組成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用組成的克百威免疫原免疫兔子后取得價、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用直接ELISA測定效價為1:16000~1:128000,純化抗體效價為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體,一起了測定了酶標(biāo)抗體的活性,效價為1:4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的穿插反響率6.19%,與呋喃酚的穿插反響率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類的穿插反響率均小于0.44%,對于三種有機磷的穿插反響率均低于0.12%。
ELISA試劑盒一起,依據(jù)抗體抗原的特異性反響的原理,進一步研究了抗克百威抗體對小鼠克百威中毒后的解毒效果,實驗結(jié)果表明,抗體能夠較好地減輕克百威對乙酰膽堿酯酶克制效果的表現(xiàn),使中毒小鼠逐步恢復(fù)正常。一起將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)組成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測定克百威與載體蛋白物比。
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