因此,這類試劑盒規(guī),如N<0.05<>(或其他數(shù)值),則按0.05計(jì)算,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,因此實(shí)驗(yàn)中必須加測(cè)陰性對(duì)照。每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙,以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域。
測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法,其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因。在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本( S)和陰性對(duì)照(N)的A值后,計(jì)算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(pati ent)的縮寫,不應(yīng)誤解。ELISA試劑盒為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。
實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。ELISA試劑盒陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí),更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。
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